來(lái)源于林伯氏白色念球菌，具有很高的比活性，是DNA提取的關(guān)鍵試劑。蛋白酶K的穩(wěn)定性非常好，在pH 4-12、溫度20℃-65℃的條件下均有活性；耐受多種蛋白質(zhì)變性劑（如SDS、尿素、螯合劑（如EDTA）及巰基試劑。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，可以降解所有蛋白質(zhì)。

蛋白酶K比較為人所熟知的作用可能就是核酸提取過(guò)程中的使用，實(shí)際上它不僅常用于多種分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)實(shí)驗(yàn)，且在生物加工過(guò)程中，如肉類嫩化、水污染消毒和生物檢測(cè)中都有很廣泛的應(yīng)用。上一期我們有聊到它的主要應(yīng)用，這期不妨聊聊它的“副業(yè)”作用吧~

【1. 制革加工】

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生物酶保毛脫毛技術(shù)是一項(xiàng)重要的制革清潔工藝技術(shù)，與傳統(tǒng)灰堿法脫毛工藝對(duì)比，酶法脫毛有著減少硫化物、石灰污染等優(yōu)勢(shì)。實(shí)驗(yàn)人員以鹽腌黃牛皮為樣品，預(yù)浸水后，去肉分割，進(jìn)行脫毛。實(shí)驗(yàn)采用有溫有浴酶法脫毛，調(diào)節(jié)好溫度和pH，加入實(shí)驗(yàn)所需用量的蛋白酶K。期間觀察皮塊脫毛狀況及脫毛速度，并收集脫毛浴液及皮樣。

研究證明：蛋白酶K對(duì)酪素和膠原纖維均具有水解作用。溫度和酶用量對(duì)蛋白酶K的脫毛效果有較大影響，而在7.5~9.0區(qū)間內(nèi)，pH值對(duì)蛋白酶K的脫毛效果影響不明顯^[1]。

【2. 肉類嫩化】

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肉的嫩度是肉類重要的感官品質(zhì)之一，蛋白酶K能分解肉的肌纖維，結(jié)締組織的蛋白質(zhì)，甚至包括彈性蛋白及膠原蛋白，使蛋白質(zhì)的各級(jí)空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，部分肽鍵斷裂，肉料吸水膨脹，質(zhì)地變嫩。在使用方法上有宰前處理法和表面浸漬處理法，宰前處理法是在宰前短時(shí)間內(nèi)將酶制劑注射到動(dòng)物的血管系統(tǒng)中，使酶在胴體中均勻分布，達(dá)到嫩化效果。表面處理浸漬法是動(dòng)物宰后對(duì)肉類通過(guò)噴灑攪拌或浸泡的方式進(jìn)行酶化處理^[2]。

【3. 污水病毒滅活】

生活中污水消毒主要使用液氯、次氯酸鈉、二氧化氯以及過(guò)氧乙酸等消毒劑滅活病毒，但以氯為主的消毒方法有產(chǎn)生毒副產(chǎn)物的潛在危害。病毒外層結(jié)構(gòu)一般以衣殼蛋白為主，蛋白酶K可以對(duì)病毒衣殼蛋白進(jìn)行破壞，從而干擾病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合。

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在一定條件下，67.5μg/mL濃度的蛋白酶K處理1h對(duì)純水和生活污水中病毒滅活率分別達(dá)到了99.4％和49.4％，處理3h的滅活率分別是>99.9％和81.1％，滅活病毒的效果明顯。用蛋白酶K進(jìn)行病毒滅活的優(yōu)點(diǎn)是消毒劑本身無(wú)害，而且不產(chǎn)生有害消毒產(chǎn)物，所以這是一種高效環(huán)保的方法^[2]。

【4. 石蠟切片抗原修復(fù)】

免疫病理檢查在非腫瘤性腎疾病的病理診斷中起重要作用，常規(guī)方法是對(duì)冷凍切片進(jìn)行免疫熒光觀察。有時(shí)臨床取材不準(zhǔn)或冷凍標(biāo)本保存失誤，不能進(jìn)行熒光觀察，導(dǎo)致病理診斷困難。近年來(lái)出現(xiàn)了免疫組織化學(xué)和免疫熒光結(jié)合的石蠟切片免疫熒光染色法，為腎活檢病理的免疫診斷作了有力的補(bǔ)充，其中抗原修復(fù)是成敗的關(guān)鍵。

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研究人員應(yīng)用蛋白酶K對(duì)腎活檢組織的石蠟切片進(jìn)行抗原修復(fù)后再行免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)其不僅可作為因冷凍組織處理欠佳導(dǎo)致免疫熒光著色不滿意時(shí)的補(bǔ)充手段，而且對(duì)冷凍組織無(wú)腎小球或未送冷凍組織的病例加做石蠟切片免疫熒光染色，可有效解決診斷困難，從而完全代替冷凍切片免疫熒光染色^[3]。

【5. 相關(guān)產(chǎn)品】

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結(jié)語(yǔ)：蛋白酶K優(yōu)良的蛋白水解能力和特性，除了在生物科學(xué)研究方面，其在食品加工、飼料生產(chǎn)、環(huán)境保護(hù)、醫(yī)藥工業(yè)、能源和資源開(kāi)發(fā)等各個(gè)領(lǐng)域都有著應(yīng)用需求，金普諾安重組蛋白酶K不含細(xì)菌內(nèi)毒素，應(yīng)用范圍比天然蛋白酶K更廣泛。企業(yè)先進(jìn)的蛋白質(zhì)工程技術(shù)及28,000升酵母平臺(tái)有效降低了單位成本，為生物醫(yī)藥研發(fā)與生產(chǎn)提供高性價(jià)比的蛋白酶K。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳梅,陳立煒,李鶴,等.蛋白酶K在黃牛皮酶脫毛中的應(yīng)用[J].皮革科學(xué)與工程, 2020, 30(5):5.DOI:10.19677/j.issn.1004-7964.2020.05.008.

[2]吳彤,王瑞明,黃磊,等.蛋白酶K的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技, 2013, 34(14):5.DOI:CNKI:SUN:SPKJ.0.2013-14-088.

[3]李昌水,張英杰,鄭江江,等.蛋白酶K修復(fù)石蠟切片免疫熒光染色在腎活檢病理診斷中的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志, 2014(1):4.DOI:10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2014.01.010.