在生物制品的制備中，不可忽視DNA殘留的去除，細(xì)胞裂解釋放目標(biāo)產(chǎn)物的同時(shí)，也會(huì)產(chǎn)生一些雜物。隨著越來(lái)越多的生物制品（重組蛋白、Vero細(xì)胞疫苗、細(xì)胞治療藥物等）進(jìn)入治療領(lǐng)域，核酸殘留是各類(lèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的重中之重。

圖源于pixabay

WHO和各國(guó)藥物監(jiān)管機(jī)構(gòu)一般控制100pg/每劑量的殘留DNA，僅限特殊情況下允許10ng/劑量。我國(guó)藥典中明確規(guī)定酵母、大腸桿菌表達(dá)的生物制品中DNA殘留量不超過(guò)10ng/劑量。

生產(chǎn)工藝中有多種方式去除殘留DNA，但是如果需要在更前端、更有效地去除核酸，同時(shí)減小純化壓力，目前傾向于選擇使用高效的核酸酶解——廣譜核酸酶。

Part.01 廣譜核酸酶

廣譜核酸酶，又稱(chēng)為全能核酸酶，一種來(lái)源于粘質(zhì)沙氏菌（Serratia marcescens，又稱(chēng)靈桿菌）的非特異性核酸內(nèi)切酶。它不含有原核生物表達(dá)的細(xì)菌內(nèi)毒素。

在功能上，它能夠剪切各種形式DNA和RNA，無(wú)論是單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀或超螺旋形式的DNA和RNA，切斷磷酸二酯鍵從而產(chǎn)生5’-磷酸核苷酸或5’-磷酸寡核苷酸。廣譜核酸酶對(duì)核酸堿基序列無(wú)特異性要求，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割，可用于除去生物制品中的核酸。

Part.02 金普諾安|產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

↑ 點(diǎn)擊進(jìn)入詳情頁(yè)

·??高度穩(wěn)定性

·??比活性大于1000KU/mg蛋白

·??無(wú)動(dòng)物源性成分

·??避免原核細(xì)胞的內(nèi)毒素污染

·??不含蛋白酶殘留

·??供應(yīng)穩(wěn)定，到貨快

Part.03 應(yīng)用領(lǐng)域

1.去除宿主核酸殘留

廣泛用于疫苗工業(yè)、蛋白和多糖類(lèi)制藥工業(yè)中，可使疫苗和蛋白類(lèi)產(chǎn)品核酸污染達(dá)到皮克(pg)級(jí)別。

2.促進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)源顆粒純化

在病毒、AAV載體及包涵體等細(xì)胞來(lái)源顆粒的純化過(guò)程中，提高得率并有效提高終產(chǎn)物純度。

3.降低細(xì)胞裂解液黏度

縮短處理時(shí)間，改善分離效果，提高病毒/蛋白產(chǎn)量，利于下游層析純化操作。

4.促進(jìn)生物分析樣品純化

可用于ELISA樣品制備，色譜層析、雙相電泳及印跡分析等過(guò)程中來(lái)提高分辨率和樣品回收率。

—??Vero細(xì)胞培養(yǎng)制備的應(yīng)用? —

哺乳動(dòng)物細(xì)胞特別是連續(xù)細(xì)胞系被用于生產(chǎn)疫苗和治療性生物制品，Vero細(xì)胞系是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中使用較為廣泛的載體，用于增加生物制品的產(chǎn)量。2005年，WHO推薦Vero細(xì)胞用于生產(chǎn)狂犬病疫苗，然而，包括Vero細(xì)胞系在內(nèi)的許多連續(xù)細(xì)胞系在用于制造人用疫苗時(shí)具有致瘤性。使用廣譜核酸酶可以去除Vero細(xì)胞中殘留的DNA，使宿主殘留DNA低于100pg/ml^[2]。

Part.04 產(chǎn)品性能

文獻(xiàn)參考：

[1]?Rai T S ,? Adams P D . ChIP-sequencing to map the epigenome of senescent cells using benzonase endonuclease[J]. Methods in Enzymology, 2016, 574:355-364.

[2] B, Si Ming Li A , et al. “Removing residual DNA from Vero-cell culture-derived human rabies vaccine by using nuclease.” Biologicals 42. 5(2014):271-276.